Niniejszy skrypt przeznaczony jest dla studentów kierunków biologicznych, zwłaszcza medycyny weterynaryjnej i biotechnologii. Przedstawiono w nim podstawowe badania wirusologiczne oraz dokładne opisy technik wykorzystywanych w laboratoriach diagnostycznych do detekcji i identyfikacji wirusów. Mamy nadzieję, że pozycja, którą przekazujemy w Państwa ręce, będzie cennym uzupełnieniem ćwiczeń praktycznych z zakresu przedmiotów wirusologia, wirusologia molekularna oraz biologia molekularna i okaże się przydatna również w późniejszej pracy w laboratorium.
Spis treści:
OD AUTORÓW 5
I. WIRUSOLOGIA 6
2. PRACA W LABORATORIUM 7
3. POBIERANIE I PRZECHOWYWANIE MATERIAŁU DO BADAŃ WIRUSOLOGICZNYCH 8
3.1. Pobieranie i obróbka próbek do badań wirusologicznych 9
3.1.1. Pobieranie krwi 9
3.1.2. Pobieranie kału 12
3.1.3. Pobieranie narządów wewnętrznych od koni padłych z podejrzeniem zakaźnego zapalenia nosa i płuc, herpeswirozy (rhinopneumonitis equorum) 13
3.1.4. Pobieranie wymazów z nosa od krów podejrzanych o zakaźne zapalenie nosa i tchawicy (rhinoiracheitis boyom. IBR/IPV, otręt bydła) 13
4. HODOWLE KOMÓRKOWE 15
4.1. Płyny odżywcze 16
4.1.1. Przygotowanie płynu odżywczego EMEM do hodowli komórek 17
4.2. Zakładanie hodowli komórkowych 18
4.2.1. Pasażowanie komórek nerki królika RK-13 znajdujących się w stacjonarnej fazie wzrostu 19
5. BANKOWANIE HODOWLI KOMÓRKOWYCH 21
5.1. Zamrażanie komórek RK-13 22
5.2. Rozmrażanie tkanek 23
6. IZOLACJA WIRUSÓW PRZY UŻYCIU TKANEK, KOMÓREK ZWIERZĘCYCH, ZWIERZĄT LABORATORYJNYCH I ZARODKÓW PTASICH 25
6.1. Zakażanie zwierząt laboratoryjnych 26
6.1.1. Zakażenie dootrzewnowe 26
6.1.2. Zakażenie podskórne 27
6.1.3. Zakażenie domięśniowe 27
6.1.4. Zakażenie dożylne 27
6.2. Zakażanie zarodków jaj ptasich 28
6.2.1. Zakażenie komory powietrznej 29
6.2.2. Zakażenie worka kosmówkowo-omoczniowego 30
6.2.3. Zakażenie błony kosmówkowo-omoczniowej 31
6.2.4. Zbieranie wirusa z płynu omoczniowego 32
6.3. Zakażanie linii komórkowych 33
6.3.1. Zakażanie komórek RK-13 wirusem EA 33
7. ILOŚCIOWE OKREŚLANIE WIRUSÓW 36
7.1. Technika rozcieńczeń i mianowanie wirusa 37
7.2. Określanie miana wirusa EA wg metody Reeda i Muncha 38
8. WPŁYW CZYNNIKÓW FIZYCZNYCH I CHEMICZNYCH NAWIRUSY 40
8.1. Ocena wrażliwości na temperaturę 56°C wirusa rzekomego pomoru drobiu (choroby Newcastle, NDV) 44
9. OTRZYMYWANIE I OCZYSZCZANIE PREPARATÓW WIRUSOWYCH 46
9.1. Izolacja RNA wirusa Arteritis z nasienia zakażonych ogierów siewców metodą trizolową 48
9.2. Ekstrakcja DNA wirusa zakaźnego zapalenia nosa i płuc koni (Herpesviridae) z tkanek i narządów poronionych płodów 50
10. ŁAŃCUCHOWA REAKCJA POLIMERAZY (PCR) W WYKRYWANIU MATERIAŁU GENETYCZNEGO WIRUSÓW 51
10.1. Wykrywanie fragmentu genu VP2 wirusa parwowirozy psów (CPV) za pomocą klasycznej reakcji PCR 55
10.2. Wykrywanie fragmentu genu białka nukleoproteiny wirusa nosówki psów (CDV) za pomocą RT-PCR 57
10.3. Wykrywanie fragmentu genu kodującego glikoproteinę gC wirusa BHV za pomocą reakcji real-time PCR 58
11. SYSTEMATYKA WIRUSÓW 60
Książka
-
Autor:
Łukasz Adaszek, Jerzy Ziętek, Stanisław Winiarczyk
-
Format:
165 x 235
-
ISBN:
978-83-7259-215-6
-
Liczba stron:
70
-
Rok wydania:
2013
-
Wydanie:
1